新疆野苹果基因组提取优化及模板浓度对ISSR-PCR影响

天津农学院学报 ›› 2017, Vol. 24 ›› Issue (1): 15-18.

新疆野苹果基因组提取优化及模板浓度对ISSR-PCR影响

张云秀¹, 杨美玲², 于玮玮¹, 李芳¹, 刘彬¹, 龙鸿¹, 阎国荣^{1,通信作者}

1. 天津农学院园艺园林学院,天津 300384;
2. 南开大学生命科学学院,天津 300071

收稿日期:2016-05-13 出版日期:2017-03-31 发布日期:2019-10-15
通讯作者: 阎国荣（1957-）,男,甘肃敦煌人,教授,博士,主要从事果树种质资源与生理生态方向研究。E-mail：yanguorong@eyou.com。
作者简介:张云秀（1991-）,女,山东章丘人,硕士在读,主要从事新疆野苹果种质资源利用与保护研究。E-mail：1058496051@qq.com。
基金资助:
新疆维吾尔自治区财政林业科技专项项目“新疆野苹果种质资源收集与评价”（无编号）

Optimization of Genome Extraction and Effect of Template Concentration on ISSR-PCR in Malus sieversii

ZHANG Yun-xiu¹, YANG Mei-ling², YU Wei-wei¹, LI Fang¹, LIU Bin¹, LONG Hong¹, YAN Guo-rong^{1,Corresponding Author}

1. College of Horticulture and Landscape, Tianjin Agricultural University, Tianjin 300384, China;
2. College of Life Sciences,Nankai University, Tianjin 300071, China

Received:2016-05-13 Online:2017-03-31 Published:2019-10-15

摘要/Abstract

摘要： 以新疆野苹果干燥叶片为材料,比较分析了CTAB法和4种改良CTAB法提取基因组DNA效果,及ISSR-PCR扩增所需最佳模板浓度。结果表明：5种方法提取的DNA在纯度和量上有很大差别,研磨时加入PVP,可有效去除多酚物质;第一次提取上清液中加入1/10体积CTAB裂解液（0.7 mol/L NaCl、10%CTAB）,可以有效去除多糖;异丙醇沉淀时加入1/9体积的乙酸钠,可加速得到白色沉淀。新疆野苹果ISSR扩增体系研究中,发现DNA模板浓度处于400~1 000 ng/μL时,ISSR-PCR扩增结果最佳。DNA提取优化及模板浓度优化为后续的分子生物学研究提供理论依据。

关键词: 新疆野苹果, DNA提取, 模板浓度, 优化

Abstract: As Malus sieversii dried leaves for materials, compared and analyzed the result of extracting genomic DNA with the CTAB method and four kinds of modified CTAB method, besides, to determine the best template concentration for ISSR- PCR. Results showed that the purity and quantity of DNA with five methods has much difference, grinding with PVP can effectively remove polyphenols; adding1/10 volume CTAB cracking in the supernatant fluid （0.7 mol/L NaCl, 10% CTAB） can effectively remove polysaccharide; isopropyl alcohol precipitating with 1/9 volume sodium acetate can get white precipitation quickly . As for the M. sieversii ISSR amplification system study, found that ISSR-PCR amplified result is best with DNA template concentration in 400 ~ 1 000 ng/μL. DNA extraction and the concentration of template optimization provide theoretical basis for subsequent molecular biology research.

Key words: Malus sieversii, DNA extraction, template concentration, optimization

中图分类号:

Q946-33

张云秀, 杨美玲, 于玮玮, 李芳, 刘彬, 龙鸿, 阎国荣. 新疆野苹果基因组提取优化及模板浓度对ISSR-PCR影响[J]. 天津农学院学报, 2017, 24(1): 15-18.

ZHANG Yun-xiu, YANG Mei-ling, YU Wei-wei, LI Fang, LIU Bin, LONG Hong, YAN Guo-rong. Optimization of Genome Extraction and Effect of Template Concentration on ISSR-PCR in Malus sieversii[J]. Journal of Tianjin Agricultural University, 2017, 24(1): 15-18.

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[1]	杨梅, 李涛, 巩文杰, 冯翰杰, 张军. 柿子酒酿造工艺优化及香气成分分析[J]. 天津农学院学报, 2023, 30(1): 12-17.
[2]	马楚楚, 陈帅君, 赵宝顶, 唐伦霞, 童应凯, 边嘉宾. 产朊假丝酵母富硒条件的优化及发酵罐培养[J]. 天津农学院学报, 2022, 29(4): 26-30.
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[8]	李月婵, 张子祎, 魏学源, 常莉, 杨薇. 红曲霉产胞外多糖的条件优化及功效活性的初步检测[J]. 天津农学院学报, 2020, 27(2): 79-83.
[9]	张子祎, 李月婵, 杨薇. 产胞外多糖红曲霉液态发酵培养基的筛选[J]. 天津农学院学报, 2019, 26(1): 59-63.
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[13]	刘彬, 张云秀, 李芳, 于玮玮, 阎国荣. 新疆野苹果果实V_C及可溶性蛋白含量的测定分析[J]. 天津农学院学报, 2016, 23(4): 14-17.
[14]	李芳, 邹妍, 刘彬, 张云秀, 龙鸿, 阎国荣. 新疆野苹果（Malus sieversii）内生菌的分离与鉴定[J]. 天津农学院学报, 2015, 22(4): 1-5.
[15]	崔艳, 吕文, 孙颖, 唐敏慧. 低醇甜型猕猴桃酒工艺条件的优化研究[J]. 天津农学院学报, 2015, 22(4): 38-40.