SUMO-β-抑制蛋白2融合基因的克隆、表达与蛋白纯化

天津农学院学报 ›› 2017, Vol. 24 ›› Issue (1): 48-51.

SUMO-β-抑制蛋白2融合基因的克隆、表达与蛋白纯化

张耀方¹, 许艳玲¹, 黄治强¹, 杜莉¹, 陈曦¹, 付裕¹, 李明刚^{2,通信作者}

1. 天津农学院基础科学学院,天津 300384;
2. 南开大学生命科学学院,天津 300071

收稿日期:2016-06-29 出版日期:2017-03-31 发布日期:2019-10-15
通讯作者: 李明刚（1959-）,男,山东高密人,教授,博士,主要从事生物技术与新药方面的研究。E-mail:mgl@nankai.edu.cn。
作者简介:张耀方（1984-）,女,吉林白山人,讲师,博士,主要从事生物制药方面的研究。E-mail: zhangyaofangff@126.com。
基金资助:
南开大学药物化学生物学国家重点实验室开放基金项目“重组胰高血糖素样肽-1纳米控释体的研究”（20163001）; 国家自然科学基金青年项目“具有开关功能胰岛素载体的制备及葡萄糖响应性的研究”（21404082）; 天津农学院大学生创新创业训练计划项目“多拷贝功能互补型双元促胰岛素的构建及其降糖活性的研究”（201610061074）

Cloning and Expression of SUMO-β-arrestin2 Fusion Gene and Purification of Recombinant Protein

ZHANG Yao-fang¹, XU Yan-ling¹, HUANG Zhi-qiang¹, DU Li¹, CHEN Xi¹, FU yu¹, LI Ming-gang^{2,Corresponding Author}

1. College of Basic Science, Tianjin Agricultural University, Tianjin 300384, China;
2. College of Life Science, Nankai University, Tianjin 300071, China

Received:2016-06-29 Online:2017-03-31 Published:2019-10-15

摘要/Abstract

摘要： 2型糖尿病是一种常见的慢性疾病,其发生与胰岛素的耐受相关。β-抑制蛋白2 （β-arrestin2）的缺失或功能紊乱,会导致胰岛素抵抗和2型糖尿病的发生。而使用β-arrestin2进行治疗可明显缓解葡萄糖不耐受及胰岛素抵抗。本研究通过重组PCR方法,将小分子泛素相关修饰物（small ubiquitin-related modifier,SUMO）与β-arrestin2基因融合,再将融合基因插入原核表达载体pET22b中,成功构建了pET22b-SUMO- β-arrestin2表达载体,将重组表达载体转入大肠杆菌Rosetta Blue（DE3）宿主细胞,使用IPTG在温度为20 ℃诱导表达,再将诱导表达后的蛋白经Ni-NTA进行纯化,成功获得SUMO-β-arrestin2蛋白,为后续β-arrestin2药效学的研究奠定基础。

关键词: β-抑制蛋白2, 糖尿病, 表达, 纯化

Abstract: Type 2 diabetes is acommon chronic disease, and it is associated with insulin resistance. Loss or dysfunction of β-arrestin2 results in the development of insulin resistance and progression of type 2 diabetes. However, administration of β-arrestin2 significantly amend glucose intolerance and insulin resistance. In this article, We fused SUMO and β-arrestin2 gene with recombinant PCR methods, and then inserted it into pET22b vector, and constructed a expression vector pET22b-SUMO- β-arrestin2 successfully. A recombinant expression plasmid was expressed in Rosetta Blue（DE3）line of E.coli with IPTG at the temperature of 20 ℃. The SUMO-β-arrestin2 fusion protein was purified with Ni-NTA successfully. Lay the foundation for subsequent pharmacodynamic research of β-arrestin2.

Key words: β-arrestin2, diabetic, expression, purify

中图分类号:

Q813

张耀方, 许艳玲, 黄治强, 杜莉, 陈曦, 付裕, 李明刚. SUMO-β-抑制蛋白2融合基因的克隆、表达与蛋白纯化[J]. 天津农学院学报, 2017, 24(1): 48-51.

ZHANG Yao-fang, XU Yan-ling, HUANG Zhi-qiang, DU Li, CHEN Xi, FU yu, LI Ming-gang. Cloning and Expression of SUMO-β-arrestin2 Fusion Gene and Purification of Recombinant Protein[J]. Journal of Tianjin Agricultural University, 2017, 24(1): 48-51.

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