虾肝肠胞虫环介导等温扩增法（LAMP）的建立

doi:10.19640/j.cnki.jtau.2018.02.013

天津农学院学报 ›› 2018, Vol. 25 ›› Issue (2): 51-54.doi: 10.19640/j.cnki.jtau.2018.02.013

虾肝肠胞虫环介导等温扩增法（LAMP）的建立

孙妍, 董学旺, 魏俊利, 薛淑霞^通信作者

天津市水生动物疫病预防控制中心,天津 300221

收稿日期:2018-01-31 出版日期:2018-06-20 发布日期:2019-11-12
通讯作者: 薛淑霞（1979-），女，副研究员，博士，主要从事水产动物分子免疫学研究。E-mail：xueshuxia_79@126.com。
作者简介:孙妍（ 1985- ），女，工程师，硕士，主要从事水产动物病害学方面研究。 E-mail ：sunyan19850409@aliyun.com。
基金资助:
天津市农业科技成果转化与推广项目（201502070）

Establishment of a LAMP assay for detection of Enterocytozoon hepatopenaei

SUN Yan, DONG Xue-wang, WEI Jun-li, XUE Shu-xia^{Corresponding Author}

Tianjin Diseases Prevention and Control Center of Aquatic Animals, Tianjin 300221, China

Received:2018-01-31 Online:2018-06-20 Published:2019-11-12

摘要/Abstract

摘要： 为建立一种快速检测虾肝肠胞虫（EHP）的环介导等温扩增法（LAMP）,根据GenBank中登录的EHP-SSU基因序列设计6条特异性引物,成功建立了EHP-LAMP检测方法。该方法检出限为3.71个质粒拷贝/μL,并且与虾其他常见病毒病的病原（WSSV、IHHNV、CMNV）均无交叉反应。采用LAMP方法和常规PCR方法对30份具有典型EHP感染症状的对虾样品进行检测,结果显示：LAMP和PCR方法的阳性检出率均为100%。结果表明,建立的EHP-LAMP方法具有高灵敏度、高特异性、高准确度的优点,为对虾肝肠胞虫的快速早期诊断奠定基础。

关键词: 对虾, 肝肠胞虫, 环介导等温扩增, 检测

Abstract: In order to develop a rapid method for detecting the Enterocytozoon hepatopenaei (EHP), a loop-mediated isothermal amplification (LAMP) assay was established for targeting EHP-SSU gene with six specific primers following the optimization of the reaction. The results showed that the lowest limit detection of EHP-LAMP assay was 3.71 copies/μL, then its specificity was verified, and no cross-reactions was found for other shrimp pathogenic viruses including WSSV, IHHNV and CMNV. Moreover, 30 samples of shrimp with typical EHP infection symptoms were detected with the LAMP and PCR method, respectively. The results showed that the positive rates of LAMP and PCR were both 100%. In conclusion, the EHP-LAMP method is suitable for EHP early diagnosis with the advantages of high sensitivity, specificity and accuracy.

Key words: shrimp, Enterocytozoon hepatopenaei (EHP), loop-mediated isothermal amplification (LAMP), detection

中图分类号:

Q786
S917.4

孙妍, 董学旺, 魏俊利, 薛淑霞. 虾肝肠胞虫环介导等温扩增法（LAMP）的建立[J]. 天津农学院学报, 2018, 25(2): 51-54.

SUN Yan, DONG Xue-wang, WEI Jun-li, XUE Shu-xia. Establishment of a LAMP assay for detection of Enterocytozoon hepatopenaei[J]. Journal of Tianjin Agricultural University, 2018, 25(2): 51-54.

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参考文献

[1] Tourtip S,Wongtripop S,Stentiford G D,et al.Enterocytozoon hepatopenaei sp. nov.(Microsporida: Enterocytozoonidae),a parasite of the black tiger shrimp Penaeus monodon(Decapoda: Penaeidae):Fine structure and phylogenetic relationships[J]. J Invert Pathol,2009,102(1):21-29.
[2] 骆云慧,石坚,方磊,等. 虾肝肠胞虫TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用[J]. 中国兽医科学,2016,46(7):847-852.
[3] 施慧,许文军,谢建军,等. 舟山地区大棚凡纳滨对虾生长缓慢病因的调查分析[J]. 中国水产科学,2017,24(2):387-394.
[4] 刘雅梅,邱亮,程东远,等. 检出虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei)的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)群体的体长和体重关系[J]. 渔业科学进展,2017,38(4):96-103.
[5] 刘珍,张庆利,万晓嫒,等. 虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei)实时荧光定量PCR检测方法的建立及对虾样品的检测[J]. 渔业科学进展,2016,37(2):119-126.
[6] 王博雅,王力,刘美如,等. 凡纳滨对虾3种主要病毒和虾肝肠胞虫在辽宁地区的流行情况分析[J]. 大连海洋大学学报,2017,32(2):150-154.
[7] 陈禄芝,余霞艳,胡一丞,等. 粤西地区凡纳滨对虾虾肝肠胞虫、传染性皮下和造血组织坏死病毒感染情况的初步调查[J]. 渔业研究,2016,38(4):273-280.
[8] Notomi T,Okayama H,Masubuchi H,et al.Loop-mediated isothermal amplification of DNA[J]. Nucleic Acids Research,2000,28(12):e63.
[9] 庞耀珊,谢芝勋,谢丽基,等. 对虾白斑综合症病毒可视化环介导等温扩增(LAMP)检测技术的建立与应
用[J]. 农业生物技术学报,2013,21(8):1002-1008.
[10] 李红梅,江晓,任春华,等. 对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒实时荧光LAMP检测方法的建立及应
用[J]. 热带生物学报,2016,7(3):307-313.
[11] Jaroenlak P,Sanguanrut P,Williams B A,et al.A nested PCR assay to avoid false positive detection of the microsporidian Enterocytozoon hepatopenaei(EHP)in environmental samples in shrimp farms[J]. Plos One,2016,11(11):e0166320.
[12] Tanga K F,Pantoja C R,Redman R M,et al.Development of in situ hybridization and PCR assays for the detection of Enterocytozoon hepatopenaei(EHP),a microsporidian parasite infecting penaeid shrimp[J]. J Invertebr Pathol,2015,130:37-41.
[13] 张娜,谢艳辉,陈进会,等. 虾肝肠胞虫Taqman荧光PCR方法的建立与应用[J]. 中国动物检疫,2017,34(10):98-103.
[14] Rajendrana K V,Shivam S,Praveena P E,et al. Emergence of Enterocytozoon hepatopenaei(EHP)in farmed Penaeus (Litopenaeus) vannamei in India[J]. Aquaculture,2016,454:272-280.
[15] 刘宝彬,杨冰,吕秀旺,等. 凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)及虾肝肠胞虫(EHP)的荧光定量PCR检测[J]. 渔业科学进展,2017,3(2):158-166.
[16] Tangprasittipap A,Jiraporn S,Chouwdee S,et al.The microsporidian Enterocytozoon hepatopenaei is not the cause of white feces syndrome in whiteleg shrimp Penaeus(Litopenaeus)vannamei[J]. BMC Veterinary Research,2013,9(1):139.

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Establishment of a LAMP assay for detection of Enterocytozoon hepatopenaei

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[1]	周晓睿, 杨磊, 娄莉娟, 宋欣, 陈江涛. 基于改进ORB-SLAM2算法的动态特征点剔除[J]. 天津农学院学报, 2024, 31(1): 88-94.
[2]	石禾云, 张娅, 吴雪娇, 王超, 徐咏全, 张军. 黑茶香气成分研究进展[J]. 天津农学院学报, 2023, 30(5): 74-81.
[3]	郑海波, 宋爽, 刘同海. 基于改进Tiny YOLOv3的交通标志检测方法[J]. 天津农学院学报, 2023, 30(2): 62-68.
[4]	赵欣然, 齐文婷, 张伟. 液相色谱法检测鸡肉中芬苯达唑及其代谢物残留[J]. 天津农学院学报, 2023, 30(1): 51-54.
[5]	张汉, 雷涛, 杨仁杰, 董桂梅. 荧光光谱法快速检测土壤中菲浓度[J]. 天津农学院学报, 2023, 30(1): 55-58.
[6]	黄兰英, 张达娟, 张树林, 马丞鸿, 黄莺. 微囊藻毒素对凡纳滨对虾急性毒性的研究[J]. 天津农学院学报, 2022, 29(4): 31-35.
[7]	张倩颖, 祁杰, 毕起源, 韩蓄, 曾倩, 彭锦星. 地沟油检测技术研究进展[J]. 天津农学院学报, 2021, 28(3): 86-89.
[8]	王安琪, 付俊红. 荷兰乳业第三方检测模式对我国的启示[J]. 天津农学院学报, 2020, 27(4): 95-97.
[9]	李烨, 李亮, 梁鹏, 李沛然. 高校快速检测实验室建设与问题浅析[J]. 天津农学院学报, 2020, 27(2): 105-108.
[10]	胡周月, 钱磊, 张志军, 张业尼. 漆酶在食品工业及其他领域上的应用进展[J]. 天津农学院学报, 2019, 26(3): 83-86.
[11]	叶天一, 刘新媛, 聂家民, 杨杰, 韩泽禹. 气相色谱法分析发酵生物气成分及含量的研究[J]. 天津农学院学报, 2018, 25(2): 60-63.
[12]	师斌杰, 于亚萍. 一种鸡舍环境监控系统的ZigBee组网设计[J]. 天津农学院学报, 2018, 25(1): 76-80.
[13]	金璐, 陈品品, 王潇, 赵昱堃, 李得康, 冀馨宁, 吴楠. 环境样品中抗生素的前处理及检测方法研究进展[J]. 天津农学院学报, 2017, 24(3): 92-96.
[14]	周宇晴, 秦梦芝,马志宏. 支持向量机和BP神经网络在可见-近红外光谱检测药品中的比较与应用[J]. 天津农学院学报, 2016, 23(2): 49-52.
[15]	邵蓬, 汪笑宇, 徐晓丽. 特异性靶基因在弧菌PCR快速检测中的应用[J]. 天津农学院学报, 2015, 22(3): 49-53.